Grand Prix Valencia menjadi momen penting bagi Pedro Acosta ketika dia berhasil menyalip Marco Bezzecchi dalam sesi latihan meskipun hanya dengan selisih waktu sangat tipis. Balapan dimulai dengan kondisi tenang, namun tidak lama setelahnya Acosta dan Bezzecchi sudah saling berduel di lintasan. Mereka bertukar posisi, namun kesalahan kecil dari Bezzecchi membuatnya terjatuh, sementara Acosta tetap konsisten dalam putaran pertama selama 10 putaran.
Pada akhir sesi, Acosta berhasil mencatatkan waktu 1:29,240 dengan menggunakan ban belakang lunak baru, yang tidak dapat dikejar oleh Bezzecchi yang mencatatkan waktu 1:29,476 dan 1:29,293. Franco Morbidelli menempati posisi ketiga dengan performa yang solid sepanjang sesi di atas Ducati. Alex Marquez menguji paket aerodinamis GP25, sementara Ai Ogura berhasil meraih posisi kelima di depan Jack Miller.
Di posisi ketujuh ada Fabio Di Giannantonio, diikuti oleh Fermin Aldeguer, yang berhasil bangkit setelah terjatuh di sesi latihan sebelumnya. Joan Mir dan Fabio Quartararo juga berhasil lolos ke Q2 dan melengkapi 10 besar. Sayangnya, Brad Binder dan Raul Fernandez gagal lolos ke Q2, begitu juga dengan Aleix Espargaro yang finis di urutan ke-13.
Maverick Vinales berada di urutan ke-18, disusul oleh Enea Bastianini dan Jorge Martín di urutan ke-22. Sementara itu, Nicolò Bulega menjadi pembalap terakhir dalam catatan waktu. Jadi, hasil Practice MotoGP Valencia ini menjadi penanda penting sebelum balapan sesungguhnya dimulai.
